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卡梅德生物 |
噬菌体展示抗体文库被广泛应用于高亲和力抗体的筛选工作,如血管生成标志物纤连蛋白,肿瘤特异性B3/B4抗原,EGFR等蛋白特异性高亲和力抗体的筛选。通过噬菌体展示技术构建的抗体文库通常来源于RT-PCR扩增外周血单核细胞,脾细胞,骨髓细胞和扁桃体来源的mRNAs形成cDNA片段,将这些基因片段拼接到噬粒载体,再转入噬菌体形成共价结构蛋白表达和体外展示。抗体重链和轻链立自由表达,然后随机地组合,形成噬菌体克隆数达到1011-1012的庞大抗体库。
Single-chain Fv(scFv)抗体文库是指将抗体的可变区(VH和VL)基因,尤其是CDR区域(互补决定区)采用不同的策略和方式,如氨基酸突变,移码读框等形成数目庞大的不同克隆,并从这些克隆中筛选出针对目的抗原的高亲和力单链Fv抗体。研究表明,抗体可变区的CDR3的多样性直接决定了抗原特异性和结合亲和力,并且CDR3-FR(frame region)组合的多样性决定了抗体经历何种方式的亲和成熟过程。
人源scFV抗体库构建项目流程:
步骤 | 服务内容 | 周期 |
抗体cDNA制备 | * 总RNA提取 * 高保真RT-PCR制备cDNA * 系统对照:Actin特异引物PCR扩增,以鉴定逆转录产品cDNA质量 | 8-9周 |
构建scFV抗体库 | * 引物设计与合成:抗体可变区兼并引物设计、合成 * 以cDNA为模板,PCR扩增抗体重链和轻链可变区基因 * scFv基因拼接 * 噬粒构建与转化:酶切、连接scFv和噬菌粒载体,电击转化TG1宿主菌,构建抗体库 * 鉴定:随机挑选20-50个克隆,PCR鉴定阳性率,测序和分析抗体序列 * 包装,>1x1013噬菌体颗粒/ml | |
交付 | * 构建报告,包括详细建程序,代表性序列信息 * 产品交付:细菌和噬菌体两种形式抗体库 |
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张经理 |
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无 | |
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蛋白生产,抗体表达,蛋白产品,抗体产品 | |
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